Bí quyết Hướng dẫn Phương pháp nhuộm Gram tăng cấp cải tiến Chi Tiết
Quý quý khách đang tìm kiếm từ khóa Phương pháp nhuộm Gram tăng cấp cải tiến 2022-06-29 03:33:57 san sẻ Bí quyết Hướng dẫn trong nội dung bài viết một cách Chi Tiết.
NHUỘM GRAM Nhuộm Gram là một phương pháp thực nghiệm nhằm mục tiêu phân biệt những loài vi trùng thành 2 nhóm Gram dương (Gram positive) và Gram âm (Gram negative) dựa vào những đặc tính hoá lý của thành tế bào. Phương pháp này được đặt tên theo người ý tưởng sáng tạo ra nó, nhà khoa học người Đan Mạch Hans Christian Gram (1853 -1938). Ông tăng trưởng kỹ thuật này vào năm 1884, về sau được Hucker và nhiều người khác tăng cấp cải tiến. I . MỤC TIÊU 1. Nắm đươc nguyên tắc của kỹ thật nhuộm Gram 2. Thực hiện được kỹ thuật nhuộm Gram 3. Nhận định được kết quả nhuộm Gram 4. Tránh được những yếu tố kỹ thuật làm sai lệch kết quả nhuộm Gram II. NỘI DUNG 1. Nguyên lý Dựa trên sự rất khác nhau về cấu trúc của vách tế bào nên trong quy trình nhuộm Gram, vi trùng Gram dương sẽ giữ lại được được phức tạp tím gentians-iod không trở thành tẩy màu bởi alcohol, trong lúc vi trùng Gram âm không giữ được phức tạp này. Do vậy, kết quả sau khoản thời hạn nhuộm là vi trùng Gram dương vẫn giữ được màu tím của gentians, còn vi trùng Gram âm bắt màu hồng của fucshin. 2. Dụng cụ, thiết bị Kính hiển vi, que cấy đầu tròn, đèn cồn, diêm, phiến kính (slide), chậu rửa, bình xịt nước cất và những dụng cụ thiết yếu. 3. Vật liệu, hoá chất (1) Các loài vi trùng hoặc những hỗn dịch những vi trùng này. Vi khuẩn Gram âm: E.coli, Salmonella,..; Gram dương: S. aureus, Bacillus cereus; dịch khung hình hoặc mẫu sinh thiết bị nghi ngờ nhiễm khuẩn. (2) Dung dịch tím gentians (3) Dung dịch Lugol (4) Dung dịch alcohol 90% (5) Dung dịch fucshin kiềm Pha thuốc nhuộm tím gentians:+ Tím gentians nồng độ 1/10 trong cồn ethylic 95[sup]0[/sup] 10ml+ Acid phenic 1ml+ Nước cất 100mlLắc đều, lọc qua giấy lọc. Pha dung dịch lugol: + Iod 1g+ Kali iodid (KI) 2g+ Nước cất 5mlNghiền tan trong cối sứ rồi cho thêm nước cất cho đủ 200ml Pha thuốc nhuộm Fucshin kiềm:+ Fucshin kiềm nồng độ 1/10 trong cồn ethylic 95[sup]0[/sup] 10ml+ Acid phenic 5ml+ Nước cất 100mlLắc đều, lọc qua giấy lọc. 4. Các bước tiến hành Bước một, dàn tiêu bản và cố định và thắt chặt tiêu bản: Dùng que cấy vô trùng lấy một ít vi trùng từ ống giống thạch nghiêng (hoặc dịch khung hình, mẫu sinh thiết bị nghi ngờ nhiễm khuẩn) hoà vào 1 giọt nước muối sinh lý ở giữa phiến kính, để khô trong phòng thí nghiệm. Cố định tiêu bản bằng phương pháp hơ nhanh trên ngọn lửa đèn cồn 2-3 lần để gắn chặt vi trùng vào phiến kính. Việc cố định và thắt chặt nhằm mục tiêu 3 mục tiêu: giết chết vi trùng, gắn chặt vi trùng vào phiến kính và làm vết bôi bắt màu tốt hơn vì những tế bào chết bắt màu tốt hơn những tế bào sống. Bước hai, nhuộm màu: – Thứ nhất, nhuộm bằng dung dịch tím gentians trong 30 giây đến 1 phút, rửa nước; – Thứ hai, nhuộm thêm dung dịch lugol và giữ trong một phút, rửa nước; – Thứ ba, khử màu: nhỏ dung dịch alcohol 90%, giữ khoảng chừng 30 giây (cho tới khi vừa thấy mất màu), rửa nước; – Thứ tư, nhuộm tiếp bằng dung dịch Fucshin trong một phút, rửa nước, để khô. * Kết quả: quan sát ở vật kính dầu 100x. Nếu nhuộm đúng vi trùng Gram dương bắt màu tím, Gram âm bắt màu hồng. 5. Giải thích tính bắt màu Gram của vi trùng Vi khuẩn Gram dương có vách tế bào dày từ 15 đến 50 nm, dạng lưới, cấu trúc bởi peptidoglycan. Chất này còn có kĩ năng giữ phức tạp tím gentians – iod. Trong khi đó, lớp vách tế bào peptidoglycan của những vi trùng Gram âm thì mỏng dính hơn và thường có thêm lớp màng lipopolysaccharde (LPS) bên phía ngoài.  Hình 2. Sơ đồ minh họa vách tế bào vi trùng Gram dương (trái) và Gram âm (phải) Sau khi nhuộm với phức tạp gentians – iod, mẫu được xử lí tiếp với hỗn hợp khử màu, làm mất đi nước của những lớp peptidoglycan trong vách tế bào Gram dương, từ đó làm giảm khoảng chừng trống giữa những phân tử và khiến vách tế bào bắt giữ phức tạp gentians – iod bên trong tế bào. Đối với vi trùng Gram âm, dung dịch alcohol 90% đóng vai trò là chất hoà tan lipit và làm tan màng ngoài của vách tế bào. Lớp peptidoglycan mỏng dính (chỉ ở tại mức 10 nm) không thể giữ lại phức tạp gentians – iod và tế bào Gram âm bị khử màu và bắt màu thuốc nhuộm bổ trợ update. 6. Những sai lầm đáng tiếc trọn vẹn có thể gặp trong phương pháp nhuộm Gram – Có những sai lầm đáng tiếc trong phương pháp nhuộm Gram làm cho vi trùng Gram dương nhuộm thành màu hồng của vi trùng Gram âm, đó là: + Phết vi trùng ở lứa cấy qúa già (trên 24h), cấu trúc vách vi trùng gram dương không hề bền chặt như ở lứa cấy trẻ, do vậy mất kĩ năng ngăn cản sự tẩy màu của alcohol. + Dung dịch lugol không hề tốt, do đã pha quá lâu và mất đi iod. Trường hợp này trọn vẹn có thể nhận ra khi dung dịch lugol không hề sậm màu. + Tẩy màu bằng alcohol quá lâu đã làm cho vi trùng Gram dương cũng trở nên tẩy màu. – Có những sai lầm đáng tiếc trong phương pháp nhuộm Gram làm cho vi trùng Gram âm nhuộm thành màu tím của vi trùng Gram dương, đó là: + Phết vi trùng quá dầy làm cho alcohol không thể tẩy màu toàn bộ vi trùng trong phết nhuộm. + Tẩy màu bằng alcohol quá ngắn hay dung dịch alcohol bị pha quá loãng làm cho màu Gram không được tẩy khỏi tế bào vi trùng. |
Video Phương pháp nhuộm Gram tăng cấp cải tiến ?
Một số hướng dẫn một cách rõ ràng hơn về Video Phương pháp nhuộm Gram tăng cấp cải tiến tiên tiến và phát triển nhất .
Chia SẻLink Tải Phương pháp nhuộm Gram tăng cấp cải tiến miễn phí
Pro đang tìm một số trong những ShareLink Tải Phương pháp nhuộm Gram tăng cấp cải tiến Free.
#Phương #pháp #nhuộm #Gram #cải #tiến